細菌回復(fù)突變試驗標(biāo)準(zhǔn)及試驗結(jié)果評價要求

531次 2024.12.30

　　細菌回復(fù)突變試驗用于檢測DNA損傷引起的基因突變。通過檢測受試物質(zhì)對受試菌株某些特制突變體的突變能力，即使該菌株從組氨酸/色氨酸依賴型突變?yōu)樵B(yǎng)型，判斷受試物質(zhì)是否為誘變劑。


　　細菌回復(fù)突變試驗測試應(yīng)在有和沒有S9代謝激活系統(tǒng)的情況下同時進行。在瓊脂培養(yǎng)基中添加微量組氨酸或色氨酸以培養(yǎng)細菌，可使細菌在最初的幾個小時內(nèi)生長并表現(xiàn)為背景苔蘚。當(dāng)添加的組氨酸/色氨酸用盡時，只有突變菌才能繼續(xù)生長成可見的反向突變菌落。


　　細菌回復(fù)突變試驗標(biāo)準(zhǔn)


　　化妝品安全技術(shù)規(guī)范（2015年版）第六章8細菌回復(fù)突變試驗（2019年第12號）


　　YY/T0870.1-2013醫(yī)療器械遺傳毒性試驗第1部分:細菌回復(fù)突變試驗


　　GB/T15670.14-2017農(nóng)藥登記毒理學(xué)試驗方法第14部分:細菌回復(fù)突變試驗


　　GB15193.4-2014食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)細菌回復(fù)突變試驗


　　細菌回復(fù)突變試驗結(jié)果評價要求


　　1、回復(fù)菌落計數(shù)


　　直接計算培養(yǎng)基上的回復(fù)菌落數(shù)，計算每個菌株每劑量三個平板上回復(fù)菌落數(shù)的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差。


　　2、合并方法的結(jié)果評價


　　在良好的背景生長條件下，試驗菌株tal535、tal537、TA98和大腸桿菌的回復(fù)菌落數(shù)等于或大于未處理對照組的2倍，其他試驗菌株回復(fù)菌落數(shù)等于或大于未處理對照組的2倍，有下列1和2情況之一可判定為陽性結(jié)果：


　?。?）劑量反應(yīng)關(guān)系；


　　（2）一個測試點具有可重復(fù)的陽性結(jié)果。


　　3、細菌回復(fù)突變試驗點試法的結(jié)果評價


　　如果供試物樣紙周圍有m個較密集的回復(fù)菌落，與未處理的對照有顯著差異，可初步判定供試物突變試驗陽性，但應(yīng)通過摻入驗證。測試。


　　4、驗證


　　明顯的陽性結(jié)果無需驗證；可疑結(jié)果應(yīng)通過其他方法驗證；陰性結(jié)果需驗證（即重復(fù)），改變試驗條件，如劑量間隔（改為5倍間隔）等。


　　5、對照組結(jié)果評價


　　陽性結(jié)果表明受試物質(zhì)在受試菌株的基因組中引起點突變。陰性結(jié)果表明受試物質(zhì)在試驗條件下未對試驗菌株誘導(dǎo)基因突變。


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