細菌回復(fù)突變試驗原理及方法有哪些

722次 2024.12.30

　　細菌回復(fù)突變試驗是一種可靠的初篩工具，用于評估化學(xué)物質(zhì)的致突變性。然而，它并不是唯一的評估方法。為了全面了解化合物的遺傳毒性和潛在的致癌風(fēng)險，通常需要結(jié)合其他的遺傳毒性測試方法和更復(fù)雜的體內(nèi)實驗。


　　細菌回復(fù)突變試驗原理


　　細菌回復(fù)突變試驗利用了特定類型的突變菌株，這些菌株攜帶有特定的基因突變，導(dǎo)致它們不能在沒有外源性營養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基中生長。這些突變菌株通常是由于缺失了合成某種必需氨基酸或維生素的能力而呈現(xiàn)營養(yǎng)缺陷型。


　　當(dāng)將這些菌株暴露于測試化合物中時，如果該化合物具有致突變性，它會誘導(dǎo)這些突變菌株產(chǎn)生基因回復(fù)突變，使其重新獲得在無外源性營養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基上生長的能力。


　　因此，通過檢測這些回復(fù)突變菌株的生長情況，可以評估化合物的致突變性。


　　細菌回復(fù)突變試驗方法


　　（1）利用沙門氏菌的遺傳缺陷：


　　實驗中使用的鼠傷寒沙門氏菌是一種組氨酸營養(yǎng)缺陷型菌株（his-）。這種菌株自身不能合成組氨酸，必須從外部環(huán)境中獲取。只有當(dāng)菌株中的組氨酸合成途徑發(fā)生回復(fù)突變，變成能夠自行合成組氨酸的野生型（his+）時，菌株才能在缺乏組氨酸的培養(yǎng)基上生長。


　?。?）檢測基因突變：


　　在正常情況下，沙門氏菌在缺乏組氨酸的培養(yǎng)基上只能通過極少數(shù)自發(fā)回變的方式生長。如果存在致突變物，它將增加菌株的基因突變率，從而使得更多的菌株發(fā)生回復(fù)突變，在缺乏組氨酸的培養(yǎng)基上生長。


　?。?）加入S9混合液：


　　某些致突變物需要經(jīng)過代謝活化才能發(fā)揮作用。為了模擬生物體內(nèi)的情況，實驗中通常需要加入由大鼠肝細胞制備的S9混合液，其中含有各種代謝酶，能夠?qū)⒛承┣爸峦蛔兾镛D(zhuǎn)化為具有活性的致突變物。


　?。?）觀察結(jié)果：


　　通過觀察培養(yǎng)基上生長的菌落數(shù)量，可以判斷受試物是否具有致突變性。如果菌落數(shù)量顯著增加，則表明受試物具有致突變潛力。