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皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)方法及標(biāo)準(zhǔn)有哪些

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2024.12.30

　　皮膚變態(tài)反應(yīng)就是常說(shuō)的皮膚過(guò)敏性疾病，主要是指人體接觸某些過(guò)敏原后，導(dǎo)致皮膚黏膜發(fā)炎而引起的一系列過(guò)敏癥狀。且過(guò)敏原可以分為吸入過(guò)敏原，接觸過(guò)敏原，食入過(guò)敏原，注射過(guò)敏原等等。不同過(guò)敏原引起不同的過(guò)敏反應(yīng)，主要表現(xiàn)為皮膚紅腫、紅斑、水泡、濕疹、脫皮，并伴有明顯的瘙癢感。

　　皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)的原理是將一種物質(zhì)接觸到皮膚上，觀察皮膚的反應(yīng)，以評(píng)估該物質(zhì)對(duì)皮膚的反應(yīng)性。該試驗(yàn)可以幫助研究人員評(píng)估產(chǎn)品的安全性和有效性。

　　皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)方法

　　一、局部封閉涂皮試驗(yàn)方法（BuehlerTest,BT）：

　　?動(dòng)物準(zhǔn)備?：選擇健康、成年雄性或雌性豚鼠，雌性動(dòng)物應(yīng)未孕或未曾產(chǎn)仔。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境應(yīng)與動(dòng)物等級(jí)相匹配并符合國(guó)家相應(yīng)規(guī)定。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料應(yīng)選用標(biāo)準(zhǔn)配合飼料，并注意補(bǔ)充適量維生素C?。

　　?誘導(dǎo)接觸?：在試驗(yàn)前24小時(shí)，用脫毛劑將豚鼠背部左側(cè)3cm×3cm范圍去毛。將受試物0.1~0.2ml涂在2cm×2cm濾紙上，并將其敷貼在去毛區(qū)，用二層紗布、一層油紙和無(wú)刺激膠布固定，持續(xù)6小時(shí)。第7天和第14天以同樣方法重復(fù)一次?。

　　?激發(fā)接觸?：末次誘導(dǎo)后14~28天，將0.1~0.2ml受試物斑貼于豚鼠背部左側(cè)2cm×2cm去毛區(qū)，用二層紗布、一層油紙和無(wú)刺激膠布固定6小時(shí)。激發(fā)接觸后24和48小時(shí)觀察皮膚反應(yīng)，按表評(píng)分?。

　　二、豚鼠最大值試驗(yàn)方法（GuineaPigMaximisationTest,GPMT）：

　　1誘導(dǎo)接觸（第0天）

　　受試物組：將頸背部去毛區(qū)（2cm×4cm)中線兩側(cè)劃定三個(gè)對(duì)稱點(diǎn)，每點(diǎn)皮內(nèi)注射0.1mL下述溶液：

　　——第1點(diǎn)1：1（體積比）FCA/水或生理鹽水的混合物；

　　——第2點(diǎn)耐受濃度的受試物；

　　——第3點(diǎn)用1：1（體積比）FCA/水或生理鹽水配制的受試物，濃度與第2點(diǎn)相同。

　　對(duì)照組：注射部位同受試物組，每點(diǎn)皮內(nèi)注射0.1mL下述溶液：

　　——第1點(diǎn)1：1（體積比）FCA/水或生理鹽水的混合物；

　　——第2點(diǎn)未稀釋的溶劑；

　　——第3點(diǎn)用1：1（體積比）FCA/水或生理鹽水配制的濃度為500g/L的溶劑。

　　2誘導(dǎo)接觸（第7天）

　　將涂有0.5g(mL)受試物的2cm×4cm濾紙敷貼在上述再次去毛的注射部位，然后用兩層紗布，一層玻璃紙覆蓋，無(wú)刺激膠布封閉固定48h。對(duì)無(wú)皮膚刺激作用的受試物，可加強(qiáng)致敏，對(duì)照組和試驗(yàn)組動(dòng)物于第二次誘導(dǎo)接觸前24h在注射部位涂抹10%十二烷基硫酸鈉(SLS)0.5mL。對(duì)照組僅用溶劑作誘導(dǎo)處理。

　　3激發(fā)接觸（第21天）

　　將豚鼠軀干部去毛，用涂有0.5g（mL）受試物的2cm×2cm濾紙片敷貼在去毛區(qū)，然后再用兩層紗布，一層玻璃紙覆蓋，無(wú)刺激膠布封閉固定24h。對(duì)照組動(dòng)物作同樣處理。如激發(fā)接觸所得結(jié)果不能確定，可在第一次激發(fā)接觸1周后進(jìn)行第二次激發(fā)接觸。對(duì)照組作同步處理。