抑菌試驗詳細步驟 抑菌效果檢測方法

53次 2025.01.15

　　抑菌是指抑制細菌生長和繁殖，使細菌的數(shù)量不會增長。抑菌不一定能殺滅細菌，但能防止細菌數(shù)量過多而導致危害。抑菌試驗是一種常用的實驗方法，用于評估抗菌劑的抑菌效果。其基本原理是將待測物質(zhì)與細菌接觸，觀察其對細菌生長的影響。


　　抑菌試驗詳細步驟


　　抑菌圈測量是微生物分析的經(jīng)典方法。它是利用抑菌物質(zhì)在涂布特定試驗菌的瓊脂培養(yǎng)基內(nèi)成球形立體狀擴散，抑制試驗菌的繁殖，在抑菌物質(zhì)的周圍形成透明圈，即抑菌圈。抑菌圈的測定(濾紙片法)詳細步驟如下：


　　1、菌種接種：將保存菌種反復轉(zhuǎn)種2次，使菌種新鮮，細菌置30℃，恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)1d，霉菌置27℃，恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)3d，備抗菌實驗用


　　2、菌懸液制備：在超凈臺里將轉(zhuǎn)接后生長良好的菌種試管斜面注入適量無菌水(約5mL)，接種環(huán)輕刮菌落，搖晃，置旋渦混合器混勻。


　　3、倒平板：在超凈臺里將培養(yǎng)基倒入平板，每板約15mL左右，水平放置，凝固后倒置放入30℃恒溫培養(yǎng)箱中，2d后觀察是否有菌落生長，若沒有則可供下一步實驗使用，否則需重新倒平板。


　　4、涂布：在超凈臺里用槍取0.1ml菌懸液注入平板，放置5min左右后用三角耙涂布均勻，每種菌設置兩個重復平板。


　　5、貼片：在超凈臺里將平板平均分為6個區(qū)，對角設置平行組，同時用無菌水做對照組,硫酸鏈霉素(10U)作陽性對照。每兩張濾紙片(直徑1.1cm或0.6cm)為一貼，用鑷子夾著濾紙片在樣品中輕輕蘸一下后，取出貼在平板的位置，輕摁一下使濾紙片牢固，置(正放)4℃冰箱中放24h。


　　6、培養(yǎng)：24h后放入(倒置)恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細菌30℃，霉菌27℃。細菌培養(yǎng)24h后觀察結果，霉菌72h后觀察結果。


　　抑菌效果檢測方法


　　1.紙片擴散法：將待測物質(zhì)涂在紙片上，放置在含有細菌的瓊脂平板上，觀察紙片周圍的細菌生長情況，評估抑菌效果。


　　2.微量稀釋法：將待測物質(zhì)按照一定比例稀釋，與細菌混合，放置在瓊脂平板上，觀察細菌生長情況，根據(jù)最小抑菌濃度評估抑菌效果。


　　3.漏斗法：將待測物質(zhì)滴入含有細菌的培養(yǎng)基中，通過漏斗篩選，觀察細菌生長情況，評估抑菌效果。


　　4.懸浮液法：將待測物質(zhì)與細菌混合，放置在離心管中，離心后觀察沉淀情況，評估抑菌效果。


　　以上是幾種常用的抑菌試驗方法。不同的方法適用于不同的實驗需求。在進行抑菌試驗時，需要注意實驗條件的控制，以保證實驗結果的準確性。